Klassische Säulenchromatographie

Klassische SäulenchromatographieAuch als flüssig-solid-Chromatographie bekannt ist eine Technik zur Trennung von Stoffen auf der Grundlage des Verteilungsunterschieds zwischen einer stationären Phase (normalerweise einem soliden Adsorbens) und einer mobilen Phase (Lösungsmittel) . Das Grundprinzip kann wie folgt zusammengefasst werden. Koeffizienten zwischen der festen Phase und der mobilen Phase .

In der Säulenchromatographie besteht die stationäre Phase normalerweise aus poröser Partikel (wie Kieselgel, Aluminiumoxid, Aktivkohlenstoff usw. .), das eine große spezifische Oberfläche und eine Adsorptionszentrum aufweist und mit Wasserstoffbindungen mit gelösten Molekülen, Van -Der -Wechselwirkungen, die zu adsorptionalen Wechselwirkungen sind, bilden können. Moleküle aus der stationären Phase und ihre Auswahl sollten gemäß der Polarität des gelösten Stoffes und den Adsorptionseigenschaften des Adsorbens . bestimmt werden

Im Trennprozess wird die Mischungslösung in die Spalte eingeführt, die die stationäre Phase . mit dem Fluss der mobilen Phase enthält. Die Komponenten bewegen die Spalte mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten aufgrund der unterschiedlichen Adsorptionskapazität der stationären Phase . Die polaren Komponenten sind normalerweise leicht zu erbessen. Es wird leicht durch die mobile Phase weggetragen, und die Bewegungsgeschwindigkeit ist auf diese Weise schneller .. Jede Komponenten bildet eine Anzahl von Farbbändern in der Spalte, um die Trennung . zu erreichen

► Zweck der Derivatbehandlung
Der Hauptzweck der Derivatisierung besteht darin, die physikalisch -chemischen Eigenschaften von Analyten so zu ändern, dass sie durch die Spaltenchromatographie . besser für die Trennung und Erkennung geeignet sind. Speziell kann die Ableitung die folgenden Ziele erreichen:

1) Verbesserte Erkennungsleistung: Durch die Einführung von Funktionsgruppen, die leicht zu erkennen sind
2) Molekulare Struktur oder Polarität ändern: Passen Sie die Polarität des Analyten an, um seine Trennung in der Spalte zu verbessern und die Spitzenverfolgung zu reduzieren und . zu überlappen. .
3) Erhöhte Volatilität: Für einige nichtflüchtige Analyten kann die Derivatisierung ihre Volatilität verbessern und sie in der Gaschromatographie leichter zu trennen und nachzuweisen. .
4) Stabiler Analyt: Sensitive funktionelle Gruppen im Analyten können durch Derivatisierung geschützt werden, um Abbau oder Änderung während der Trennung und Erkennung zu verhindern. .

► Die Art der Derivatbehandlung
Die Derivatisierung ist hauptsächlich in zwei Typen unterteilt: Vorbereitungsableitung und Post-Säulenivatisierung:

1) Ableitung vor der Falumn:
Bevor der Analyte in die Spalte eingeht, reagiert er chemisch mit den Ableitungen, um die Ableitungen . zu erzeugen
Die Ableitungen werden dann getrennt und in einer Spalte . erkannt
Die Prepolumn-Derivatisierung hat die Vorteile freier Reaktionsbedingungen und eine einfache Mehrschrittreaktion, kann jedoch auch Verunreinigungen einführen oder Proben verlieren .
2) Ableitung der Spalte:
Die Analyten sind zuerst in der chromatographischen Säule getrennt und reagieren dann chemisch mit den Ableitern in der Derivatzelle .}
Die resultierenden Derivate werden dann zur Erkennung in den Detektor eingegeben .

Die Ableitung nach der Säule hat die Vorteile einer guten Reproduzierbarkeit und weniger Einflussfaktoren, erfordert jedoch zusätzliche Instrumente und Geräte .
► Anwendungsbeispiele für die Derivatverarbeitung
Bei der Extraktion und Trennung von natürlichen pharmazeutischen chemischen Komponenten kann es mit der derivativen Verarbeitungstechnologie die folgenden Anwendungen erreichen:

1) Verbesserte Nachweisempfindlichkeit: In der Aminosäureanalyse kann beispielsweise die Einführung leicht nachweisbarer funktioneller Gruppen (wie Fluorophore) durch Vorab Derivatisierung die Signalstärke von Aminosäuren am Detektor erhöhen, wodurch die Empfindlichkeit des Nachweiss .} verbessert wird
2) Verbesserung des Trennungseffekts: Für einige Verbindungen mit einer ähnlichen Polarität oder einer ähnlichen Struktur kann die Polarität durch Derivatisierungsbehandlung angepasst werden, sodass der Trennungseffekt auf die chromatographische Säule verbessert werden kann.
3) Protection of sensitive functional groups: For analytes containing sensitive functional groups (such as phenolic hydroxyl, amino, etc.), derivatization can protect these functional groups from degradation or change during separation and detection. For example, in carbohydrate analysis, hydroxyl functional groups can be protected by acetylation derivatization to prevent their degradation during Trennung .