Konventionelle Säulenchromatographie

Die Vorbereitungsarbeiten sollten gut durchgeführt werden:
Beachten Sie bei der Auswahl einer Spalte, ob es ein Schleifbrett gibt. Denken Sie für Säulen ohne Schleifbretter daran, den Boden mit etwas Baumwolle zu füllen. Die Baumwolle sollte nicht zu dick oder zu dünn sein, solange es das Silikon daran hindert, abzutreten. (Der Blogger hat direkt einen Kleiderbügel abgebaut und es benutzt, um Baumwolle in den Stecker auf dem Stecker zu stecken.)
Bereiten Sie die Mindestpolaritätseluent, die UV -Lampe (empfohlen für Laborpersonal, Handheld, jederzeit bereit, ein Foto aufzunehmen), Druckausrüstung und Testrohrregal nach Bedarf bereit zu sein!

Wählen Sie eine geeignete Säule aus, fügen Sie Silikongel hinzu, einweichen Sie das Silikongel und flachen Sie es ab
Die Auswahl vonKonventionelle Säulenchromatographieist sehr wichtig und ihre Größe sollte basierend auf der Produktmenge berechnet werden, die im Allgemeinen unterteilt werden kann in:

Das häufigste Verhältnis von Säulendurchmesser zu Höhe im Labor liegt im Allgemeinen zwischen 1: 2,5 und 1:15. Die Menge an Kieselgel, die als stationäre Phase während der Probenbelastung verwendet wird, beträgt etwa das 20- bis 40 -fache der Probe. Der Standard für die Auswahl von Spalten sollte auf der TLC -Plattenstiegssituation Ihrer Probe basieren. Wenn es in unmittelbarer Nähe viele Verunreinigungen gibt, versuchen Sie, eine größere Säule so weit wie möglich zu wählen, damit Ihre Probe mit einer kleinen dünnen Schicht (empfohlene Dicke unter 5 mm) bedeckt werden kann. Wenn die Verunreinigungen weit entfernt sind, kann diese Dicke natürlich erhöht werden, aber es wird nicht empfohlen, dass die Dicke Ihrer Probe 2 cm überschreitet, es sei denn, das Produkt wird einfach gewaschen.

Viele Menschen machen einen Fehler zu denken, dass das Hinzufügen von mehr Silikon, auch wenn es für meine Probe dicker ist, gut getrennt werden kann? Diese Antwort ist negativ!
Der Grund dafür ist, dass diese Leute nie gedacht haben, dass die unterhalb und höheren Stichproben nicht auf derselben Linie liefen, sodass sie nur einige reine erhalten konnten, von denen die meisten gekreuzt wurden, ganz zu schweigen von unrein, Zeit und Lösungsmitteln zu verschwenden!

Das ist auch der Grund, warum die Probe eine Ausdünnung erfordert!

Nach der Auswahl der Säule kann das Hinzufügen von Silikon über einen Fütterungstrichter durchgeführt werden. Geben Sie gleichzeitig unbedingt eine Maske und arbeiten Sie in einer Rauchhaube. Der Grund dafür wird nicht vom Blogger (Silikose) ausgearbeitet.
Was die Infiltration von Kieselgel betrifft, so ist der empfohlene Vorgang: Erstens platzieren Sie die Kieselgelsäule mit dem silica -Gel vertikal eingebaut, die Oberfläche des Kieselgels mit der Hand, die Unterseite der Kieselgelsäule an eine Wasserpumpe anschließen, das Kieselgel aus den geringsten polarischen Elementen pumpen. Wenn das Eluent im Begriff ist, auszulaufen, schließen Sie das Absperrventil, um zu verhindern, dass Lösungsmittel in die Wasserpumpe gepumpt werden.
Unter Druck kann das Silikongel gleichmäßig durch Spülen von sieben oder acht Säulenvolumina mit der geringsten Menge des Entwicklungsmittels gleichmäßig eingeweicht werden.

Probe oben

Fügen Sie wasserfreies Natriumsulfat oder Quarzsand hinzu
Um zu vermeiden, dass die Probenschicht während der Zugabe von Eluent beeinflusst wird und Unebenheit, Deformation und Beeinflussung der Trennungseffizienz verursacht, wird eine Schicht aus wasserfreiem Natriumsulfat oder Quarzsand im Allgemeinen auf die Probenschicht gelegt.
Unsere Ingenieure ziehen es persönlich vor, wasserfreies Natriumsulfat zu legen, da es auch eine Trocknungsfunktion hat und Lösungsmitteln wie Dichlormethan freundlich ist, die anfällig für Verflüchtigung, Wärmeabsorption und Kondensation sind!

Gradientenelution, Probenahme und Sammlung
Spülen Sie nach dem Laden zunächst die Spalte mit einem kleinen polaren Lösungsmittel (ein Lösungsmittel, das es nicht erlaubt, dass das Produkt durch die Spaltenvolumina {2-3 (ein Spaltenvolumen wird als das Volumen der fließenden mobilen Phase) definiert, um eine Gleichmäßigkeit zu gewährleisten, und wählen Sie dann einen Anteil für die Elution.

Wie wähle ich das Eluent aus, das durch die Spalte fließt?
Das Verhältnis von Eluent ist das Verhältnis, wenn Ihr Produkt einen HF -Wert von etwa 0. 2 auf der TLC -Platte erreicht
Dies ist die Erfahrung des Spaltenwaschens, die ich viele Bücher gelesen und geteilt habe, und der tatsächliche Prozess ist auch sehr ähnlich. Persönlich bevorzuge ich es, den Gradienten zweimal um zu reduzieren.
Wenn das Lösungsmittel für das TLC -Plattenklettern beispielsweise PE/EA =2: 1 ist, ist der Blogger eher mit der Gradientenelution von PE/EA =4: 1 mit der Gradientenelution beginnt und endet bei PE/EA {4}}: 1, was im Allgemeinen zu besseren Ergebnissen führt.

Es gibt auch Techniken beim Sammeln von Eluenten. Sie können zuerst ein größeres Testrohr auswählen, um es zu empfangen. Wenn sich TLC dem Zielpunkt nähert, wechseln Sie zu einem kleineren Reagenzglas. Dies kann die Möglichkeit verringern, mehr zu erhalten und Verunreinigungen zu vermeiden.

Wenn Sie auf Situationen stoßen, in denen Verunreinigungspunkte und Produktpunkte nahe beieinander liegen, insbesondere solche mit schwacher Fluoreszenz, denken Sie daran, keinen Druck auszuüben. Wählen Sie stattdessen die Säule unter normalem Druck und ändern Sie das Rohr jedes Mal, wenn die Hälfte oder weniger Röhrchen angeschlossen sind, was auch die Reinigungswahrscheinlichkeit erhöhen kann.

Denken Sie daran, die Säule nicht rechtzeitig zu handhaben!
Viele Menschen haben die Angewohnheit, davon auszugehen, dass die Säule vergangen und getrocknet wurde, wenn in der späteren Phase kein Produkt in ein oder zwei Röhren nach TLC vorhanden ist.
Ich erkannte nur, dass die Ausbeute zu niedrig war, als ich sie berechnete, oder als ich ein Spektrum herstellte, stellte ich fest, dass das Spektrum falsch war und den falschen Punkt verpasste. Ich bereute es tief.
Es wird daher empfohlen, dass Sie nach Abschluss des gewünschten Punktes nicht beeilen, die Spalte zu verarbeiten. Führen Sie stattdessen die nukleare Magnetresonanz durch, um vor der Verarbeitung mit der Ausbeute zu entsprechen.
Wenn Sie beschäftigt sind oder es eilig haben, andere Verbindungen damit zu reinigenKonventionelle SäulenchromatographieEs wird empfohlen, mit einer hohen Polarität gutartigem gemischtem Lösungsmittel auszuspülen und diesen Teil des Eluenten für die Identifizierungsergebnisse getrennt zu lassen.