Protein -A -Chromatographie -Säule
2.Chromatographische Säule (Rotationstyp)
3.Chromatographische Säule (Handbuch)
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Beschreibung
Technische Parameter
A Proteina cHromatographiecOlumnist eine Trennungssäule, die zum Reinigen von Proteinen verwendet wird, die Protein A als Affinitätssubstrat verwenden, wobei ein Bindungsmechanismus verwendet wird, der für Immunglobuline (IgG) spezifisch ist, um IgG-reiche Gemische von anderen Verunreinigungen zu trennen. Protein A ist ein aus Bakterien abgeleiteter Protein, das für den FC-Teil von Antikörpern, insbesondere IgG-Antikörpern, eine hohe Affinität und Spezifität aufweist.
Protein -A -Säulen werden üblicherweise zur Reinigung von IgG und anderen Proteinen aus Serum, Plasma und Zellkultur verwendet und sind eine der häufigsten Techniken, die in vielen molekularen Biologie und biopharmazeutischen Studien verwendet werden.
Das Thermo Scientific Pierce ™ Protein Eine Chromatographie-Reinigungssäule ist beispielsweise eine vorbereitende Vorverpackungsvorrichtung, mit der polyklonale und monoklonale Antikörper isolieren und reinigen können. Diese Reinigungssäulen eignen sich zur routinemäßigen Affinitätsreinigung von polyklonalen und monoklonalen IgGs aus Serum-, Aszites- und Zellkulturüberständen. Das Produkt verfügt über natürliche Protein A, Agaroseharzunterstützung, Inert und stabil, hohe Kapazität und bietet eine schnelle, einfache, wiederholbare chromatographische Trennung und ist für eine Vielzahl von Verwendungen erneuerbar.
Parameter
Merkmale und Vorteile
Als wichtiges Instrument im Bereich der Bioseparationstechnologie spielt Protein -A -Chromatographie -Säule eine wichtige Rolle bei der Proteinreinigung, insbesondere bei der Trennung von Immunglobulin -IgG mit seinen einzigartigen Eigenschaften und signifikanten Vorteilen. Das Folgende ist eine eingehende Analyse der Merkmale und Vorteile von Protein-A-Säulen, um ihren Wert in der bioscientifischen Forschung und der industriellen Produktion vollständig zu demonstrieren.
Überblick über Eigenschaften
Hohe Affinität und Spezifität
Der Kern des Proteins -A -Säulens ist ihr oberflächenfestes Protein -A -Molekül, ein Zellwandprotein, das aus Staphylococcus aureus abgeleitet ist und eine hohe Affinität und Spezifität für das FC -Segment von Immunglobulin -IgG aufweist. Diese Eigenschaft ermöglicht es Protein-A-Säulen, IgG-Moleküle in komplexen biologischen Proben wie Serum-, Plasma- oder Zellkulturüberständen effizient und genau zu erfassen, wodurch andere nicht-zielgerichtete Proteine und Verunreinigungen effektiv entfernt werden.
Breite Anwendbarkeit
Das Protein -A -Säule ist nicht nur für die Reinigung von IgG aus einer Vielzahl von Quellen geeignet, einschließlich Serum oder Plasma von Tieren wie Menschen, Mäusen und Kaninchen, sondern auch für monoklonale oder polyklonale Antikörper, die aus verschiedenen Zellkulturmystemen erhalten wurden. Darüber hinaus eignet es sich auch zur Trennung von IgG -Molekülen mit unterschiedlichen Molekulargewichten, Subtypen und Ladungszuständen, was deren breite Anwendbarkeit demonstriert.
Effiziente Trennung und Reinigung
Dank der hohen Affinität zwischen Protein A und IgG kann das Protein -A -Säulen eine schnelle IgG -Adsorption und -Elution erreichen, wodurch der Reinigungszyklus verkürzt und die Produktionseffizienz verbessert wird. Gleichzeitig können die Reinheit und Wiederherstellung von IgG durch die Optimierung der Elutionsbedingungen weiter verbessert werden, um den hohen Standards der wissenschaftlichen Forschung und der industriellen Produktion zu erfüllen.
Gute Stabilität und Haltbarkeit
Protein-A-Säulen verwenden normalerweise qualitativ hochwertige Matrixmaterialien wie Agarose, Cellulose usw. Diese Materialien haben eine gute physikalische und chemische Stabilität und können hohem Druck, hohe Temperatur und einer Vielzahl von chemischen Reagenzentien standhalten, um langfristige Stabilität und Haltbarkeit zu gewährleisten.
Detaillierte Erklärung der Vorteile
Verbesserung der Reinigungseffizienz
Die hohe Affinität und Spezifität des Proteins, die eine Säule einer Säule von IgG, effizienter macht und die Reinigungsschritte und -zeit erheblich verringert und die Gesamtarbeitseffizienz verbessert. Gleichzeitig bieten die hohe Reinheit und hohe Wiederherstellung von IgG -Produkten auch eine zuverlässige Garantie für nachfolgende biologische Experimente und die Entwicklung von Arzneimitteln.
Produktionskosten senken
Aufgrund der Haltbarkeit und Wiederverwendbarkeit des Proteins -A -Säulens werden die Kosten der einzelnen Reinigung effektiv kontrolliert. Durch die Optimierung der Betriebsbedingungen und Regenerationsmethoden kann die Lebensdauer der Spalte weiter erweitert und die Produktionskosten weiter gesenkt werden.
Produktqualität sicherstellen
Die hohe Spezifität und die hohe Reinheit Garantie für Protein -A -Säulen machen die gereinigten IgG -Produkte einen hohen Grad an Gleichmäßigkeit und Stabilität, was für nachfolgende biologische Experimente, die Entwicklung von Antikörpern und Immuntherapie -Anwendungen von entscheidender Bedeutung ist.
Leicht zu bedienen und zu warten
Modernes Protein Ein Säulendesign berücksichtigt normalerweise Benutzerfreundlichkeit, wie z. B. vorbelastete Spalte, einsatzbereites Design usw., wodurch der Betrieb einfacher und schneller wird. Gleichzeitig bieten die unterstützenden Regenerationsreagenzien und -richtlinien auch Bequemlichkeit für die Wartung und Wartung der Säule.
Abschluss
Zusammenfassend spielt eine chromatographische Säule von Protein A eine unersetzliche Rolle in der biologischen Wissenschaft und der industriellen Produktion mit ihren Merkmalen hoher Affinität, Spezifität, breiter Anwendbarkeit, effizienter Trennung und Reinigung, guter Stabilität und Haltbarkeit sowie der Vorteile der Verbesserung der Reinigungseffizienz, der Verringerung der Produktionsqualität und der einfachen Betrieb sowie der Einhaltung der Produkte und der einfachen Betrieb sowie der Erhaltung. Mit dem kontinuierlichen Fortschritt der Biotechnologie und der zunehmenden Nachfrage werden die Leistung und Anwendbarkeit von Protein -A -Säulen weiterhin optimiert und verbessert, was effizientere und zuverlässigere Lösungen für weitere Forschungs- und Anwendungsbereiche bietet.
Anwendung von gereinigtem Immunglobulin (IgG)
Anwendung von Protein -A -Säule bei der Reinigung von IgG
Effiziente Reinigung:
Das Protein -A -Säule ist hochspezifisch und selektiv, was eine effiziente Trennung und Reinigung von IgG durch komplexe Gemische ermöglicht.
Unabhängig davon, ob IgG aus Serum, Plasma oder Zellkultur extrahiert wird, bieten Protein -A -Säulen ein Produkt mit hohem Reinheit.
Geeignet für eine Vielzahl von Säugetieren
Protein -A -Säule ist nicht nur für die menschliche IgG -Reinigung geeignet, sondern auch für Kaninchen, Schwein, Hund, Katze und andere IgG -Reinigung geeignet.
Dies macht das Protein eine Säule mit einem breiten Anwendungswert in Tierversuche, Arzneimittelentwicklung und klinischer Diagnose.
Einfach zu bedienen
Modernes Protein-A-Säulen verwenden normalerweise rede zu verwendende Vorverpackungsgeräte, die einfach und schnell zu bedienen sind.
Benutzer können IgG mit hohem Reinheit erhalten, indem sie einfache Vorbehandlungs- und Elutionsschritte in den Anweisungen befolgen.
Wiederholbarkeit und Stabilität
Das Protein -A -Säule hat eine hohe Wiederholbarkeit und Stabilität, was die konsistenten Ergebnisse jedes Reinigungsexperiments gewährleisten kann.
Dies ist besonders wichtig für Anwendungsszenarien, die Massenproduktion und Qualitätskontrolle erfordern.
Protein -A -Säulenauswahl und Vorsichtsmaßnahmen
Geben Sie die Auswahl ein
Bei der Auswahl eines Proteins -A -Säule müssen die Säulenkapazität, die Durchflussrate, der Druckabfall und die anderen Parameter berücksichtigt werden, um sicherzustellen, dass die Bedürfnisse des Experiments oder der Produktion erfüllt sind.
Gleichzeitig ist es auch notwendig, die Regenerationskapazität und Lebensdauer der Spalte zu berücksichtigen, um die Kosten zu senken und die Effizienz zu verbessern.
Vorsichtsmaßnahmen für Betrieb
Vor der Verwendung eines Proteins A -Säule muss die Säule angemessen vorbehandelt und ausgeglichen sein.
Während des Belastungsprozesses muss die entsprechende Durchflussrate und der geeignete Druck gesteuert werden, um eine Blockierung oder Beschädigung der Säule zu vermeiden.
Während des Elutionsprozesses müssen die entsprechenden Elutionsbedingungen und die Elutionsbedingungen ausgewählt werden, um sicherzustellen, dass das IgG vollständig aus der Säule eluiert werden kann.
Nach dem Gebrauch muss die Spalte ordnungsgemäß gereinigt und aufbewahrt werden, um ihre Lebensdauer zu verlängern.
Vorteile und Herausforderungen von Protein -A -Säule in der IgG -Reinigung
Vorteile:
Hohe Effizienz, Spezifität und Selektivität.
Geeignet für die Reinigung einer Vielzahl von Iggs von Säugetieren.
Einfacher und schneller Betrieb, hohe Wiederholbarkeit und Stabilität.
Herausforderung:
Die Kosten für Protein -A -Säulen sind relativ hoch, insbesondere für die Massenproduktion.
In einigen Fällen, beispielsweise wenn in der Stichprobe hohe Konzentrationen an Verunreinigungen oder Verunreinigungen vorhanden sind, können zusätzliche Vorbehandlungsschritte erforderlich sein, um die Reinigungseffizienz zu verbessern.
Anwendung in der Entwicklung und Produktion von Antikörpermedikamenten
Anwendung von Protein -A -Säulen in der Entwicklung von Antikörpernmedikamenten
Antikörper -Screening und Identifizierung
In der frühen Entwicklungsphase von Antikörpermedikamenten können Protein -A -Säulen verwendet werden, um Antikörper mit spezifischer Affinität und Spezifität zu überprüfen und zu identifizieren. Durch Messung der Bindungskapazität des Antikörpers gegen Protein A kann das Qualitäts- und Reinigungspotential des Antikörpers vorläufig bewertet werden.
Darüber hinaus kann das Protein -A -Säule verwendet werden, um die besten Mobilfunkklone zu bestimmen, dh diejenigen, die die größte Anzahl an gezielter Antikörper ausdrücken können.
Antikörpertiterüberwachung
Während der Zellkultur kann das Protein -A -Säule verwendet werden, um Antikörpertiter, die Konzentration von Antikörpern im Zellkulturüberstand, zu überwachen. Dies ist wichtig, um die optimale Sammelzeit zu bestimmen, um sicherzustellen, dass eine ausreichende Menge und Qualität der Antikörper gesammelt werden.
Zum Beispiel kann die TSKGel -Protein A -5 PW -Spalte monoklonale Antikörpertiter im Zellkulturüberstand schnell erfassen und genau erfassen, das einen hohen Durchsatz, eine hohe Empfindlichkeit und eine hohe Genauigkeit aufweist.
Optimierung des Antikörperreinigungsprozesses
Protein -A -Säulen können verwendet werden, um Antikörperreinigungsprozessbedingungen wie Pufferzusammensetzung, pH, Ionenstärke und Durchflussrate zu optimieren. Durch die Anpassung dieser Bedingungen können die Reinheit und Ertrag des Antikörpers verbessert werden und die Produktionskosten reduziert werden.
Darüber hinaus können Protein -A -Säulen verwendet werden, um die Wirksamkeit verschiedener Reinigungsschritte zu bewerten, um die Prozessverbesserung und -optimierung zu leiten.
Die Anwendung von Protein -A -Chromatographie -Säule bei der Produktion von Antikörpermedikamenten
Antikörperaufnahme:
Bei der Produktion von Antikörpernmedikamenten werden Protein -A -Säulen häufig als Auswahlwerkzeug für den Capture -Schritt verwendet. Mit diesem Schritt können Zielantikörper effizient aus dem Zellkulturüberstand erfasst werden, während die meisten Verunreinigungen entfernt werden.
Beispielsweise werden Agilents Agilent Bio-Monolith-Protein A-Säule und die Chromax® A20-Säule von BLINKER im Antikörper-Erfassungsschritt weit verbreitet und durch hohe Durchsatz, Selektivität und Stabilität charakterisiert.
Antikörperreinheit:
Während das Protein -A -Säule im Antikörper -Erfassungsschritt gut abschneidet, sind in einigen Fällen weitere Verfeinerungsschritte erforderlich, um die Reinheit und Gleichmäßigkeit des Antikörpers zu verbessern. Es ist jedoch wichtig anzumerken, dass einige spezifische Reinigungsschritte unter Verwendung anderer Arten von chromatographischen Medien wie der Ionenaustauschchromatographie oder der Chromatographie der hydrophoben Wechselwirkung angemessener sein können.
Dennoch kann das Protein -A -Säule als Hilfsmittel im Reinigungsschritt verwendet werden, um Restverunreinigungen wie Protein -A -Liganden, Wirtszellproteine (HCP), DNA und Viren zu entfernen.
Prozessskalierung und Validierung:
Protein-A-Säulen spielen auch eine wichtige Rolle in der Scale-up- und Validierungsphase des Antikörper-Arzneimittelproduktionsprozesses. Die Leistung und Stabilität von Protein-A-chromatographischen Säulen in der Massenproduktion kann durch Prozessskala-Up-Experimente bewertet werden, die die tatsächlichen Produktionsbedingungen simulieren.
Darüber hinaus kann die Konsistenz und Zuverlässigkeit von Protein -A -Chromatographie -Säulen im Produktionsprozess durch Verifizierungsexperimente gewährleistet werden, was eine starke Garantie für die kommerzielle Produktion von Antikörpermedikamenten bietet.
Anwendung und Aussicht
Anwendung: Protein Eine Chromatographie -Säule wird in der Entwicklung und Produktion von Antikörpermedikamenten häufig verwendet und auch in der biologischen Forschung und der klinischen Diagnose verwendet.
Aussichten: Mit der kontinuierlichen Ausdehnung des Antikörper -Arzneimittelmarktes und der kontinuierlichen Entwicklung der Biotechnologie wird die Nachfrage nach Protein -Chromatographie -Säulen weiter zunehmen. Gleichzeitig wird die Entstehung neuer Füllstoffe und chromatographischer Techniken auch die Weiterentwicklung und Optimierung von Protein -A -Chromatographie -Säulen fördern.
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